组织解剖、处理和包埋对于保存组织形态和确保染色质量至关重要。我们建议由经过培训的人员进行相关操作。在这里我们将提供一些在新鲜冰冻组织（FF样本）及福尔马林固定石蜡包埋组织（FFPE样本）切片中常见问题的解决方案。

 

 

 

 

组织切片制备小贴士

新鲜冰冻样本（FF样本）

1. 将组织块从-80°C冰箱转移到低温恒温器时，保持将组织块一直放入装满干冰的容器中；

2. 在转移组织之前，请确保低温恒温器已达到所选温度；

3. 在开始组织切片之前，确保在选定的低温恒温器温度下，平衡组织至少 20 分钟，待组织块达到预设温度；

4. 每次切片过程可能需要一个新的刀片以避免撕裂组织；

5. 脂肪组织，如淋巴结和乳腺样本，需要每隔几个切片用乙醇擦拭刀片以去除残留脂肪，保持刀片锋利。

 

组织切片上常见损伤和避免措施

1. 切片时组织破裂

可能引起的原因：刀片有缺口。由于存在脂肪，包含脂肪组织（例如淋巴结、乳腺、皮肤）的复杂样品可能难以切片

解决方法：

// 每次切片使用新的刀片

// 选择适合特定目标组织的低温恒温器和切片温度

// 如果组织太硬而无法切片，等待更长的时间，待组织在低温恒温器温度下平衡后再进行切片

2. 出现空洞

可能引起的原因：过度冷冻或冷冻不足出现自溶或形成冰晶

解决方法：

// 尽量减少组织解剖和冷冻之间的时间。解剖后迅速冷冻组织

// 在将组织从动物身上解剖之前，将干冰堆在组织上也有帮助

// 对于过度冷冻：用刀片额外转动几圈来抛光组织块以产生摩擦，并通过戴手套的手指按压5-10秒来预热组织块

// 对于冷冻不足：在转移组织之前，请确保低温恒温器达到选定的温度，在某些情况下，为组织块添加散热器也会有所帮助

3. 冰晶和奶酪状外观

可能引起的原因：组织冷冻太慢，水形成结晶。大冰晶会破坏细胞膜，导致孔洞的形成

解决方法：

// 更快地冷冻组织（3或4秒直到冻住）以防止水结晶（水会变成玻璃体形式）。这可能需要将组织浸入-80°C或更冷的流体中，或完全包埋在粉末状的CO2中。建议将冷的 （-80°C） 异戊wan用于完全组织浸泡

// 不要冷冻感兴趣的组织周围的脂肪组织

// 使用较小的组织-尺寸小于或等于 0.5 x 0.5 x 0.3 厘米

// 不要使用大于卡盘直径的组织

// 在制作组织块之前，用纱布按压组织表面

// 冷冻后，将少量冷藏（4°C）的OCT放在冷藏基座上，然后将纸巾放在上面并浸入基座以快速冷冻OCT

// 冷冻后，不要将组织在-20°C下储存超过一个小时

4. 出现气泡

可能引起的原因：盖玻片下的气泡会导致组织干燥

解决方法：

// 将盖玻片放在低温恒温器里

// 用手指或镊子轻轻地移除切片上的气泡

// 一些用户发现，将切片放在盖玻片区域时把手指放在背面也有帮助。这种温差可以使这部分得到很好地伸展

// 上下移动盖玻片也可以帮助组织伸展

 

福尔马林固定石蜡包埋组织（FFPE样本）

1. 在切片时，组织无法附着在石蜡块上或从石蜡块上脱落

可能引起的原因：组织中残留的水导致脱水不足和石蜡浸润不足

解决方法：

使用新鲜试剂处理FFPE样本

2. 将组织片放入水浴中时，组织会迅速解离

可能引起的原因：

// 水浴温度在45-50°C之间，组织则未被充分处理

// 用于处理的组织过厚

// 针对该组织类型处理时间过短

// 处理试剂被水浸透

// 石蜡被二jia苯或异丙醇浸透

解决方法：

更换试剂，并按照正确的处理方案重新处理组织

3. 组织无法贴片或容易脱片

可能引起的原因：

// 组织片在用二jia苯脱蜡前放置在了烤箱中

// 组织处理不足

// 试剂被水浸透或被前面用到的试剂污染

解决方法：

更换试剂和石蜡，并按照适当的方案重新处理组织

4. 包埋时组织过于柔软或呈糊状

可能引起的原因：

// 用于处理的组织过厚

// 针对该组织类型处理时间过短

// 处理试剂被水浸透

// 石蜡被二jia苯或异丙醇浸透

解决方法：

// 更换试剂和石蜡，减少组织厚度，并按照适当的方案重新处理组织

5. 石蜡处理后出现大块破碎、开裂或折叠

可能引起的原因：过度脱水。在组织块处理过程中去除了过多的水份

解决方法：

切片前将浸湿的棉纱布放在组织蜡块上 5 -10 秒钟。这允许水份穿透15-20 μm，从而获得高质量的切片